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細(xì)胞培養(yǎng)基的操作過程您了解嗎?
更新時間:2021-03-09瀏覽:1904次

  細(xì)胞培養(yǎng)基的操作過程您了解嗎?

  細(xì)胞培養(yǎng)基是人工模擬細(xì)胞在體內(nèi)成長的養(yǎng)分環(huán)境,是供應(yīng)細(xì)胞養(yǎng)分和促進(jìn)細(xì)胞成長增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。培育液或培育基的含義簡直相同,英文都是medium。當(dāng)它是粉劑時,傾向性地稱為培育基,而將粉劑配成液體后,多稱為培育液。培育液中常常補(bǔ)加血清、抗生素等成分。

  過程:

  一、復(fù)蘇

  1.把凍存管從液氮中取出來,當(dāng)即投入37℃水浴鍋中,輕微搖晃。液體都融化后(大約1-1.5分鐘),拿出來噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺里。

  2.把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培育基的15ml的離心管中(用培育基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來),1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

  3.把上清液倒掉,加1ml培育基把細(xì)胞懸浮起來。吸到裝有10ml培育基的10cm培育皿中前后左右輕輕搖晃,使培育皿中的細(xì)胞均勻分布。

  4.標(biāo)好細(xì)胞品種和日期、培育人姓名等,放到CO2培育箱中培育,細(xì)胞貼壁后換培育基。

  5.3天換一次培育基。

  二、傳代

  1.培育皿中的細(xì)胞覆蓋率到達(dá)80%-90%時要傳代。

  2.把原有培育基吸掉。

  3.加恰當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細(xì)胞就行),消化1-2分鐘。

  4.細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培育基終止消化。

  5.用移液槍吹打細(xì)胞,把細(xì)胞都懸浮起來。

  6.把細(xì)胞吸到15ml的離心管中,1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

  7.倒掉上清液,加1-2ml培育基,把細(xì)胞都吹起來。

  8.依據(jù)細(xì)胞品種把細(xì)胞傳到幾個培育皿中。一般,癌細(xì)胞分5個,正常細(xì)胞傳3個,繼續(xù)培育。

  三、凍存

  把細(xì)胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,中止幾分鐘,寫明細(xì)胞品種,凍存日期4℃30min,-20℃30min,-80℃過夜,然后放到液氮灌中保存。

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